· poliakrilamidgel akrilamid monomer, polimerizatsiya boshlang'ich moddasi, katalizator va tuz va tampon aralashmasi bilan birga bo'lishi kerak.
· akrilamidva BIS (N, N '- metilen qo'sh akrilamid) monomer shaklidagi gel matritsadir.
· ammoniy persulfat yopishtiruvchi polimerizatsiya jarayonini boshlaydi.Yelimning formulasi suvda tayyorlangan 10% ammoniy persulfat eritmasini talab qiladi.Ma'lumotlarning aksariyati faol foydalanish zarurligini ko'rsatdi.Biroq, 10% eritma faollikni sezilarli darajada yo'qotmasdan bir necha hafta davomida 4 ℃ haroratda joylashtirilishi mumkin.10 ml gacha qiling va elim yig'ilmasa, tashlang.
Maslahat: foizakrilamidketma-ketlikda elim va oqsil elim bir xil emas.Agar oldindan tayyorlangan akrilamid: BIS eritmasidan foydalansangiz, to'g'ri shishani olishingizga ishonch hosil qiling.
· TEMED (N, N, N ', N '- tetrametil etilendiamin) - katalizator, jigarrang shishada, muzlatgichga joylashtirilgan.Yelimni quyishdan oldin qo'shing.
· Elektroforezda ishlatiladigan poliakrilamid elektroforez oynasi har safar oldin va keyin yuvilishi kerak.Elektroforezdan so'ng yumshoq cho'tka va mato bilan issiq sovunli suvda yuving, distillangan suv bilan yuving va quriting.
· ichi bo'sh polimer bilan namlik va chang paydo bo'lishi mumkin.Elektroforezdan oldin shisha plastinkani shisha tozalagich bilan tozalang va yumshoq cho'tka bilan artib oling.Distillangan suv bilan yuvib tashlang va qog'oz salfetka bilan yaxshilab quriting.Qog'oz bilan artishdan oldin 70% etanol bilan yuvish tozalash va quritishni tezlashtirishga yordam beradi.Akrilamid namunalarini ketma-ket qo'shing: BIS, suv, bufer eritmasi, ammoniy persulfat, TEMED.Yaxshilab silkiting va darhol quying.
Poliakrilamidni polimerizatsiya qilishdan oldin gazsizlantirish kerak emas.(Akrilamid oldin pufakchalarni olib tashlash uchun vakuumga joylashtirilar edi, chunki kislorod polimerizatsiyani inhibe qiladi.)
Gorizontal yopishtiruvchi nuqta namunasi maslahatlari.
· aniqroq ko'rish uchun bir nechta namunali teshik qilish uchun pastki qutiga qora qog'oz parchasini qo'ying, qora fon.
· yelim idishi bilan to'ldirilgan bufer, kolloid ustida.
· chetida yorug'lik bo'lsa, chiroqlarni yoqing, yorug'lik kolloid porlasin.Namunani pipetkaga torting.
· avtomatik pipetlash moslamasidan foydalanish.
· 10-200 mu 1 suyuqlik harakatlanuvchi nuqta namunadagi nuqtalarning ko'pchiligida ishlatilishi mumkin.Juda kichik namuna teshiklari uchun (10m1 dan kam) elim ketma-ketligi uchun ishlatiladigan uzun pipetka boshi qulayroqdir.
· sekin harakatlanuvchi suyuqlikni nafas olayotgan holda, faqat namunaga botiriladi.Namuna glitserin bilan yopishqoq bo'lib ko'rinishi mumkin va tez nasos bilan pipetka boshiga havo pufakchalari tushishi mumkin.
· Namunalar pipetka boshini nafas olgach, suyuqlik boshini trubaning chetida muloyimlik bilan siljitadi yoki artish qog'ozi suyuqlik boshini tomchilardan tashqarida so'radi.Namunani so'rib olishdan ehtiyot bo'ling.
Namunani namuna teshigiga joylashtiring
· Bir oz bosimni ushlab turish uchun pipetlash moslamasi, namunalarni suyuqlik boshini biroz harakatga keltiring.
· tamponga o'rnatilgan pipet boshi, nuqta teshiklaridan bir oz balandroq, ijobiy bosimni ushlab turing.Pipetkaning uchi kichik teshikka kiritilishi mumkin.
· asta-sekin va barqaror ravishda namunalar chiqariladi.Pipetka uchi namunaning nuqta teshigi ustiga qo'yiladi va namuna teshikka cho'kib ketadi.Namunani itarish o'rniga namuna teshigini to'ldirish uchun cho'ktiring.
· suyuqlik boshi bilan namunaning oxirgi tomchisi tushgandan so'ng, suyuqlik ikkinchi oyoqqa o'tadi, suyuqlikni sekin ko'taradi, buferdan tashqariga chiqadi.
Vertikal elim namunasini qanday qilish kerak?
· ikki bo'lak shisha o'rtasida hosil vertikal yelim nuqtasi namuna teshiklari.Juda yupqa elimda pipetka boshini hatto ikkita shisha plastinka orasiga qo'yib bo'lmaydi.Glitseringa e'tibor bering!Pipetka boshini namuna teshigi ustiga qo'ying va namuna teshikka cho'kib ketadi.
· nuqta namuna oldin, polipropilen asil gel namuna teshik vertikal nuqtasini qo'yish ishonch hosil qiling toza chayiladi.Namuna teshigining pastki qismida paydo bo'lishi mumkin bo'lgan polimerlanmagan akrilamid va suvni yuving.Suv namuna teshigini sezilarli darajada kichikroq qilishi mumkin.25 ml yoki 50 ml shprits va 18 kalibrli ignadan foydalaning.Elektroforez buferini to'kib tashlang va namuna teshigini ehtiyotkorlik bilan yuving.
· Namuna teshigini ko'rish qiyin bo'lishi mumkin, lekin shu bilan birga, qolganlari oson.Agar ortiqcha teshiklar mavjud bo'lsa, namuna buferi bromofenol ko'k bilan sinovdan o'tkazilishi mumkin.
Xabar vaqti: 31-mart-2023-yil